Суточный анализ мочи на копропорфирин. Последние доказательства с помощью анализа мочи на порфирины. Опасные последствия порфирии

Комплексное определение порфиринов (7 параметров)

Перечень тестов в составе исследования:

• гексакарбоксипорфирин;
• гептакарбоксипорфирин;
• копропорфирин I;
• копропорфирин III;
• пентакарбоксипорфирин;
• уропорфирин;
• общий порфирин.

Порфирины мочи
Порфирины мочи - промежуточные соединения в синтезе гема, являющегося частью молекулы гемоглобина, которая осуществляет транспортировку кислорода. При нарушении синтеза гема концентрация порфиринов в моче увеличивается.

Порфирины представляют собой оранжево-красные флюоресцирующие соединения, состоящие из 4 колец пиррола, которые образуются в процессе биосинтеза гема. Они обнаруживаются во всех клетках, принимают участие в энергетическом обмене и экскретируются с мочой в небольших количествах. Повышение в моче уровня порфиринов или порфириногенов свидетельствует о нарушении биосинтеза гема, которое бывает врожденным, например, при наследственных ферментопатиях, и приобретенным, например, при заболеваниях печени и гемолитической анемии.

Определение в моче уровня отдельных порфиринов или порфириногенов позволяет выявить недостаточность отдельных ферментов, участвующих в биосинтезе гема. В некоторых случаях количественному анализу предшествует проведение качественных скрининговых тестов (для этого используют произвольно взятую пробу мочи). В случае положительных результатов исследуют суточную мочу.

Сопоставление уровней порфиринов в моче, плазме крови и кале повышает достоверность диагностики порфирий.

Порфириновые болезни
Порфирии (болезни порфириновые) - наследственные или приобретённые (как результат воздействия химических агентов) дефекты ферментов, участвующих в биосинтезе гема.

Порфирии классифицируют в зависимости от первичной локализации нарушения синтеза порфиринов:

• эритропоэтическая порфирия обусловлена нарушением синтеза порфиринов эритробластами костного мозга и проявляется главным образом кожной фотосенсибилизацией (вследствие активации УФО повышенного отложения порфиринов в коже);
• печёночная порфирия обусловлена нарушением синтеза порфиринов в печени и проявляется главным образом острыми неврологическими нарушениями (приступы артериальной гипертензии, колики в животе, психозы и невропатии) без кожной фотосенсибилизации. Во время приступа в плазме и моче повышается концентрация предшественников порфирина - дельта-аминолевулиновой кислоты и порфобилиногена.

Показания:

• анемия;
• гепатиты;
• отравления свинцом.

Подготовка
Накануне сдачи анализа не рекомендуется употреблять в пищу овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (свекла, морковь, клюква и т.п.), принимать диуретики.

Утром опорожнить мочевой пузырь (эта порция мочи выливается в унитаз). Зафиксировать время мочеиспускания, например: «8:00».

Следующие 24 часа собрать всю выделенную мочу в сухую чистую емкость вместимостью 2–3 литра.

После завершения сбора мочи, содержимое емкости нужно точно измерить. На контейнере нужно указать суточный объем мочи (диурез) в миллилитрах. Например: «Диурез: 1250 мл».

Мочу обязательно тщательно перемешать и сразу же отлить 30–50 мл в стерильный контейнер с крышкой. Всю мочу, собранную за сутки, приносить не надо.

В течение всего времени сбора и до отправки, биоматериал должен храниться в холодильнике при 2–8°С. Материал должен быть доставлен в медицинский офис в день окончания сбора.

Интерпретация результатов
В норме экскреция уропорфиринов с мочой составляет от 27 до 52 мкг/ сут (СИ: 32–63 нмоль/сут), а копропорфиринов - от 34 до 230 мкг/сут (СИ: 52–351 нмоль/сут).

Повышение в моче содержания порфиринов и их предшественников - характерный признак порфирий. Кроме того, экскреция порфиринов может возрастать при вирусном гепатите, лимфогранулематозе, поражении ЦНС, циррозе печени, а также отравлениях солями тяжелых металлов, бензолом и четыреххлористым углеродом.

Факторы, повышающие результат:

• применение барбитуратов, хлоралгидрата, хлорпропамида, сульфаниламидов, мепробамата, хлордиазепоксида - индуцирует порфирию или порфиринурию; от приема этих препаратов следует по возможности отказаться за 12 дней до проведения исследования;
• прием пероральных контрацептивов, гризеофульвина (экскреция порфиринов с мочой увеличивается);
• беременность или менструация (возможно повышение или снижение содержания порфиринов в моче);
• применение рифампицина повышает содержание уробилиногена в моче;
• нарушение биосинтеза гема на разных этапах способствует повышению в моче содержания порфиринов и их предшественников и развитию порфирий.

Порфирия - группа врожденных расстройств, обусловленных дефектом синтеза гема - железосодержащей части . - приобретенная.

Критерии диагноза

1. характерные симптомы и лабораторные данные
2. идентификация порфирина и метаболитов синтеза гема в стуле, плазме ,
3. измерение активности ферментов
4. генетическое тестирование

У бо­лее 80% гетерозиготных пациентов порфирия протекает бессимптомно.

По клиническому течению заболевания часто порфирии делят на острые формы порфирии и формы, протекающие преимущественно с поражением кожных покровов.

Острые приступы порфирии могут включать абдоминальные боли и нарушение психики, парестезии, лихорадку, реже - судороги, нейромышечную слабость, . Острые приступы порфирии характерны для острой интермиттирующей порфирии, копропорфирии. Возникновение приступа провоцируются лекарствами (особенно барбитураты, алкоголь и сульфаниламиды; также дифенилгидантоин, хлордиазепоксид, эргометрин, некоторые стероиды и др.), инфекцией, голоданием.

Единственным сипмтомом острого приступа порфирии может быть резкое повышение в крови уровня порфобилиногена.

У пациентов с бессимптомным носительством может быть всего несколько острых приступов порфирии за всю жизнь, причем уровни аминолевулиновой кислоты, порфобилиногена и порфирина в моче, кале, крови могут оставатся в норме.

Лабораторная диагностика

Для подтверждения диагноза острой порфирии лабораторные данные должны включать:

• суточное количество в моче 5-аминолевулиновой кислоты,
• порфобилиноген в моче,
• уропорфирин в моче,
• копропорфирин в моче; моча должна быть заморожена, так как порфирин быстро разрушается, особенно при комнатной температуре.,
• порфирин плазмы,
• свободный протопорфирин эритроцитов,
• кал для количественного определения копропорфирина и протопорфирина,
• тест Уотсона-Шварца показывает количество порфирина в моче (в мочу добавляют реактив Эрлиха или ацетат натрия; положительным считается, если при добавлении хлороформа произошло окрашивание в вишнево-красный цвет), является количественным, но низкочувствительным.

Важно!

• Доказательством порфирии служит гемолитическая анемия или за­болевание печени; флуоресценция в соответствующих тканях и определение активности фермен­тов в эритроцитах ткани печени и культуре фибробластов. Читайте о диагностике анемии в статье « ».
• Уровня аминолевулиновой кислоты и порфобилиногена измеряют во время острых приступов порфирии.
• Некоторые лекарства могут провоцировать приступы порфирии (стимулиру­ют синтез гема, воздействуя на аминолевулиновую кислоту), например, алкоголь, антипиретики, барбитураты, эстро­гены, фенилгидразин, фенитоин и сульфаниламиды.
• Измерение активности ферментов и анализ ДНК способствуют определению типа порфирии.
• Тесты на порфирин в моче (флуорометрический метод) - некоторые препараты тоже провоцируют флуоресценцию, например, акрифлавин, этоксазин, сульфаметоксазол, тетрациклин, фенозопиридин.

Классификация порфирии

1. Эритропоэтические формы

• Эритропоэтическая копропорфирия.

2. Печеночные формы

3. Гепатоэритропоэтические формы

• Гепатоэритропоэтическая порфирия.

Сравнение типов порфирии

	Дефект фермента	Локус мутации	Начало болезни	Частота встречаемости
Порфирия, вызванная дефицитом аминолеву-линатдегидратазы	дегидратаза аминолевулиновой кислоты, ~ 5% нормы	аутос. рецес. 9q34 7 мутаций	вариабельно	описано лишь несколько случаев
Острая перемежающая­ся порфирия	дезаминаза порфобилиногена, 50% нормы	аутос. домин. 11 q23.3 более 227 мутаций	редко до зрелого возраста	Лапландия: 1:1000; везде 1,5:100000
Врожденная эритропоэ­тическая порфирия	уропорфириноген-III-косинтаза	аутос. рецес. 10 q25.2-26.3	в утробеи при рождении	менее 200 описан­ных случаев
Кожная порфирия	уропорфириноген-декарбоксилаза	приобретенная также аутос. домин. 1р34	30-40 лет	часто в США и Европе
Гепатоэритропоэтиче­ская порфирия	уропорфириноген-декарбоксилаза	аутос. рецес.	до 2 лет	менее 20 описанных случаев
Наследственная копро­порфирия	копропорфирино-геноксидаза, 50% нормы	аутос. домин. 3 ql2 36 мутаций	в любой период	менее 50 описанных случаев
Смешанная порфирия	протопорфириногеноксидаза,	аутос. домин. lq22 120 мутаций	обычно в 15-30 лет	Южная Африка 3:1000; в других регио­нах редко
Эритропоэтическаяпротопорфирия	феррохелатаза	аутос. домин. 18 q21.3	1-4 года	менее 50 описанных случаев

Пофирия was last modified: Ноябрь 10th, 2017 by Мария Салецкая

Тест на порфирины – это спектроскопический анализ, проводимый для проверки уровня порфиринов в организме пациента. Это один из тестов, применяемых для диагностики порфирии, генетического заболевания, симптомы которого могут оказаться смертельными. Анализ на порфирины проверяет присутствие порфобилиногена и других порфиринов в организме. Анализ мочи на порфирины обычно раньше других тестов может определить данное заболевание. Исследование на порфирины, к сожалению, не проводится в первую очередь, так как это редкое заболевание, симптомы которого присущи многим другим болезням.

Что означает повышенный уровень порфиринов в организме?

Повышенный уровень порфиринов в организме означает, что человек страдает от порфирии. Это генетическое заболевание, поэтому все члены семьи также должны пройти проверку. Заболевание может протекать остро, в таком случае обычно повреждаются печень и нервная система. Это может означать, что имеют место быть неврологические проблемы, такие как сильные и резкие перепады настроения, что означает, что у пациента имеется биполярное расстройство. Приступ острой порфирии может сопровождаться тошнотой, сильной болью и нехваткой дыхания в связи со слабостью мышц. Кожная форма этого заболевания становится причиной того, что зубы пациента приобретают коричневый цвет.

Нормальный уровень порфиринов в организме

Порфирия – это заболевание, вызываемое накоплением порфиринов в организме. Порфирины – это естественные химикаты, которые существуют в человеческом организме, и являются предшественниками производства гема, который впоследствии образует . Проблема возникает в том случае, когда гены, ответственные за производство ферментов, не работают или не производят один и более из восьми ферментов, используемых при синтезе гема. Единственный способ управлять этим состоянием – принимать препараты, содержащие гем. Это уменьшит производство гема и снизит выработку порфиринов.

Опасные последствия порфирии

Порфирия воздействует на кожу, нервную систему и печень. Это очень серьезное заболевание, которое причиняет настолько сильную боль, что для того, чтобы ее купировать, необходим морфий. Некоторые обстоятельства могут запустить развитие этих симптомов, важно их распознать и немедленно обратиться за медицинской помощью. Нелишним было бы носить на одежде какой-либо индикатор, который говорил бы медикам о том, что вы являетесь потенциальным пациентом, больным порфирией.

Видео

Порфиринурия — это увеличение порфиринов в моче, может быть симптомом порфирии или заболеваний печени, интоксикации, цитостатической терапии, инфекции, железодефицитной и гемолитической анемий, лимфогранулематоза, лейкоза.

Порфирины — это промежуточные продукты синтеза гема (небелковая часть гемоглобина). Они образуются из аминокислоты глицина и производного янтарной кислоты - сукцинил-коэнзима А. Основные количества порфиринов синтезируются в костном мозге (для образования гема гемоглобина) и печени (для синтеза окислительно-восстановительных ферментов, гема миоглобина, миелина, костной и других тканей).

В норме с мочой выделяются небольшие количества уро- и копропорфиринов. Усиление экскреции порфиринов (порфиринурия) наблюдается при поражении печени. Здоровая печень способна окислять и выделять продукты метаболизма порфиринов в виде копро-и протопорфиринов с калом. При выключении этого пути пигменты возвращаются в кровяное русло, проходят почечный фильтр и выделяются в повышенном количестве с мочой (порфиринурия).

Прием алкоголя, рентгеновское облучение, физическое напряжение, гемолиз эритроцитов, миоглобинурия ведут к повышению уровня порфиринов мочи (порфиринурии). При почечной недостаточности содержание порфиринов в моче уменьшается.

Выделение с мочой порфобилиногена (ПБГ) окрашивает мочу в красный или розовый цвет и характерно для острой перемежающейся порфирии, которая сопровождается поражениями мышечной, центральной и периферической нервной системы. Гетерозиготная форма имеет длительное латентное течение, гомозиготная - тяжелое полисиндромное заболевание.

Порфирины - циклические соединения, образованные четырьмя пиррольными кольцами, связанными между собой метенильными мостиками, синтезируются из глицина и сукцинил-CoA через образование δ-аминолевулиновой кислоты и порфобилиногена.

Порфирины способны образовывать комплексы с ионами металлов, связывающихся с атомами азота пиррольных колец. Примерами служат железопорфирины, в частности гем, входящий в состав гемоглобина, и магнийсодержащий порфирин - хлорофилл - пигмент растений, участвующий в фотосинтезе.

Превращение порфобилиногена в порфирин может происходить просто при нагревании в кислой среде (например, в кислой моче), в тканях это превращение катализируется специфическими ферментами. Все порфириногены бесцветны, тогда как все порфирины окрашены.

Копропорфирины I и III растворимы в смесях эфира и ледяной уксусной кислоты, из которых их можно экстрагировать соляной кислотой. Уропорфирины, напротив, в этих смесях нерастворимы, но частично растворимы в этилацетате, и их также можно экстрагировать соляной кислотой. Полученные солянокислые растворы при облучении ультрафиолетовым светом дают красное флюоресцентное окрашивание. Характерные полосы поглощения могут быть зарегистрированы с помощью спектрофотометра.

Последовательно образующиеся в процессе синтеза гема из δ-аминолевулиновой кислоты интермедиаты становятся все более гидрофобными. Это повышение гидрофобности отражается на распределении интермедиатов синтеза гема в составе мочи и кала. Более полярный уропорфири-ноген экскретируется преимущественно с мочой, а более гидрофобные копропорфириноген и протопорфириноген оказываются преимущественно в желчи и удаляются с калом.

Унифицированный метод определения порфобилиногена с пара-диметиламинобензальдегидом

Принцип метода . При реакции порфобилиногена с пара-диметиламинобензальдегидом образуется соединение красного цвета. Повышение специфичности реакции достигается добавлением ацетата натрия. Уробилиноген, производные индола, скатола и другие соединения, дающие аналогичную реакцию с пара-диметиламинобензальдегидом, удаляют экстракцией бутанолом и хлороформом, в которых порфобилиноген нерастворим.

Реактивы . 1) пара-диметиламинобензальдегид; 2) концентрированная соляная кислота; 3) реактив Эрлиха: 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной соляной кислоты, приливают 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла, стабилен; 4) насыщенный раствор ацетата натрия: 375 г CH 3 COONa × ЗН 2 O или 226 г CH 3 COONa растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным, хранят его при температуре 20 °С; 5) хлороформ; 6) бутиловый спирт; 7) индикаторная бумага для измерения pH в интервале 4,0–5,0.

Постановка пробы . Исследуют мочу в первые 2–3 ч после мочеиспускания. В пробирке смешивают по 2,5 мл мочи и реактива Эрлиха, добавляют 5 мл насыщенного раствора CH 3 COONa, перемешивают. Измеряют pH, который должен быть в пределах 4,0–5,0. При pH меньше 4,0 пробу подщелачивают раствором ацетата натрия.

Оценка результатов . При отсутствии развития окраски результат считается отрицательным. Если проба окрашивается в розовый или красный цвет, в пробирку добавляют 5 мл хлороформа и встряхивают. Окрашивание хлороформа при бесцветном или слегка желтоватом верхнем слое также позволяет считать пробу отрицательной. Если окрашенным остается слой над хлороформом, то 6–8 мл из него переносят в другую пробирку, добавляют бутанол в соотношении 1: 2 и встряхивают. При плохом разделении слоев жидкостей пробу центрифугируют. Окрашивание бутанола свидетельствует о низком содержании порфобилиногена - проба также отрицательна. Если окрашенным остается исследуемый слой, то в моче концентрация порфобилиногена выше нормальной. В норме концентрация порфобилиногена в моче - до 2 мг/л. Данным методом порфобилиноген определяется при концентрации более 6 мг/л.

Примечание : при хранении мочи более 3 ч при комнатной температуре положительная реакция может стать отрицательной, что связано с превращением порфобилиногена в порфирин в кислой среде и образованием ингибиторов реакций. При невозможности исследования мочи в первые 2 ч хранить ее необходимо в холодильнике при 4‘°С, доведя pH до 6,0–7,0. В этих условиях порфобилиноген стабилен в течение длительного времени.

Клиническое значение определения порфиринов

Принято различать первичные и вторичные порфинурии. К первым, обычно называемым порфириями, относят группу наследственных заболеваний, для каждого из которых характерен набор экскретируемых с мочой порфиринов и их предшественников. Вторичные порфинурии возникают вследствие нарушения функций печени или кроветворных органов в результате каких-либо первичных заболеваний, например тяжелых гепатитов, интоксикаций свинцом, фосфором, алкоголем, бензолом, четыреххлористым углеродом, некоторых злокачественных опухолях и аллергических состояниях, циррозах печени и т. п. При вторичных порфинуриях в моче обнаруживаются значительные количества копропорфиринов.

У здоровых людей с мочой за сутки в норме выводится в среднем около 67 мкг копропорфиринов; на изомер I типа приходится в среднем 14 мкг/сут, на изомер III типа - 53 мкг/сут. Отклонения в этом соотношении могут служить диагностическим признаком при некоторых заболеваниях печени.